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重组牛肠激酶(rEK)

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重组牛肠激酶(rEK)

产品简介
肠激酶,是一种高度特异性的丝氨酸蛋白酶,用于融合蛋白酶切消化,将与目的蛋白融合的分子伴侣或蛋白标签去掉。
本产品是由基因工程毕赤酵母(Pichia Pastoris)表达的,能专一识别肽链中的DDDDK位点并在K后切断肽链的高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶经HPLC 纯化,纯度高,特异性高,不含其他蛋白酶。肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键:天冬氨酸- 天冬氨酸- 天冬氨酸-天冬氨酸- 赖氨酸(DDDDK)。可以在较宽pH 范围(4.5-9.5)和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。

产品特色及优势
①毕赤酵母表达:不同于大肠杆菌表达的基因工程牛肠激酶催化亚基,本重组牛肠激酶催化亚基的两对二硫键均完全正确形成以保证正确的三维结构,且具备对活性非常关键的糖基化修饰,因此与天然酶同样具有极高的活性(较大肠杆菌表达的产物活性高2-3个数量级)和严谨的识别位点,且切割速率较全酶更快。与一些天然牛肠激酶制品不同,本重组牛肠激酶纯度极高,不会发生任何杂蛋白酶引起的二级切割;本重组牛肠激酶活性极高,使用相同活性的本重组牛肠激酶引入的蛋白量仅为使用大肠杆菌重组牛肠激酶时引入蛋白量的千分之一。
②6-His标签设计:本重组牛肠激酶专为切割重组表达融合蛋白之需要而设计,含有His(6)重组标签,可通过亲和层析的方法快速分离和去除。由于高活性的本重组牛肠激酶用量极低,且不会发生非特异性的切割。

外观

淡黄色液体,无异味

活性

≥ 5.0 U/µL

纯度

≥95%

pH (25℃)

7.5-8.5

分子量

40.0±5.0KD


使用说明:
①建议酶切条件:15℃,16小时,缓冲液:20Mm Tris-HCl(pH8.0),50mM NaCl, 2mM CaCl2,1μL rEK在建议酶切条件下,16小时水解融合蛋白2.5mg。
②使用方法
小量优化:
100μL酶切反应建议条件如下:
pH 8.0 酶切缓冲液(10X)10μL 重组牛肠激酶(以rEK稀释储存液先稀释) 0.1IU 融合蛋白(5.0μg/μL) 10μL 加水至 100μL 于15℃经过16小时反应后,用SDS-PAGE检测酶切效果
大量酶切:
可直接选择已优化的反应条件,如前所述酶切缓冲液(10X),按小量酶切条件等比例放大,并用SDS-PAGE检测酶切效果。或将目标蛋白适配至建议酶切条件下,按小量酶切条件等比例放大,并用SDS-PAGE检测酶切效果。
③质量保证:本产品在-20°C非冰冻条件下保存可保持完整活性一年以上。

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